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方法编号：5022

1 适用范围：适用于各类食品、原料和纯净水等样品中大肠菌群的快速测定。

2 方法原理：将乳糖、显色剂和选择性培养基加载在纸片上，经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性，记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。

3方法特点：与国标法中的九管法相对应，将原来几步的试验简化为一步，时间由78h缩短为24h以内，省去了制备培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作，随时可以打开包装进行抽样检测。

4 操作方法

4.1样品处理：无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL灭菌生理盐水的采样瓶或均质杯中，经充分振摇做成1：10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1：10样品匀液，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇试管制成1：100的稀释液。以此类推，每个稀释度更换一支灭菌吸管。

4.2接种：选取两个稀释度进行接种，普通食品一般采用1：10和1：100这两个稀释度，饮料和饮用水采用原液和1：10两个稀释度。每份由三片大纸片（接10mL）,六片小纸片（接1mL）组成,大片每小袋二张叠放算作一片。用灭菌吸管吸取10 mL 1：10稀释液加到含有大纸片的塑料袋中（相当于接样品1g），吸透后平放，做三个重复。再用1mL灭菌吸管吸取1 mL同一稀释液涂布到含有小纸片的塑料袋中（相当于接样品0.1g），做三个重复。再取一支1 mL灭菌吸管吸取1 mL 1：100稀释液涂布到含有小纸片的塑料袋中（相当于接样品0.01g），做三个重复。

4.3 培养：将接种好的纸片（可叠放）放入37°C培养箱中培养15h～24h。

5结果判断与计数：若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性纸片。纸片保持紫兰色不变或在紫兰色背景上呈现红色斑点，但周围没有黄色均为大肠菌群阴性纸片。记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。如接种的*个稀释度的稀释液为原液，应将表上查出的结果除以10，以此类推。

6注意事项：如果样品的酸碱度在pH7以下，应先用灭菌1mol/L氢氧化钠（NaOH）调节溶液调至中性，避免因pH的原因导致的纸片变黄而影响结果观察。

方法注解

1 检测意义：大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被广泛应用于食品卫生工作中。大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，大肠菌群数的高低，表明了食品及食品生产过程中受粪便污染的程度。大肠菌群计数纸片方法与传统方法相比，节省了许多时间，省去了大量辅助性工作。

2 编写说明

2.1目前，国外某一企业出品的大肠菌群计数纸片的检测结果已与平板培养法相当，但产品售价相对较高。国内生产的此类产品在2007年经山东省疾病预防控制中心微生物所验证时，如广州天河绿洲生化研究中心的产品与平板法检测结果的比率大约在90％左右，将其用于样品中不得检出大肠菌群的参数标准是可行的。在对样品要求大肠菌群以cfu/mL.g（菌落形成单位）表述时，可参照菌落计数的方法进行。

2.2在一些实验室中，使用国产大肠菌群检测试剂盒的方法。中国疾病预防控制中心营养与食品安全所对天津诺凡公司出品的试剂盒与国标法进行了50份样品的对比实验，相关系数为r=0.992,p=0.000。两种方法虽然都需要48h出结果，但试剂盒法具有易操作、省物力的优点。

3 国家标准检验方法检索

1. GB 4789.3—2010食品安全国家标准-食品微生物学检验-大肠菌群计数