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特征1. 优良的保真性 | |
KOD -Plus-系列的酶具有强力3'→5'核酸外切酶活性(Proof-reading活性),相比KOD DNA polymerase,保真性更高,约为Taq DNA polymerase的80倍。zui适用于克隆。 |
<几点建议>
●PCR产物的克隆
由于本酶的PCR产物已被平滑化,可用平滑末端克隆法进行克隆。此时,如已对载体进行了脱磷酸化处理,就需要对PCR产物进行磷酸化,或使用带5'磷酸基的引物。 另外,由于本酶的PCR产物已被平滑化,不能直接进行TA克隆。可使用按以下方法开发的TA克隆试剂盒「TArget Clone -Plus-」。
●PCR条件的设定 品名 包装 保存温度 Code No. 价格 KOD -Plus- 200U×1 -20℃ KOD-201 RMB 800 (200U×1)×5 -20℃ KOD-201B RMB 3700 200U×1 -20℃ KOD-211 RMB 1000 (200U×1)×5 -20℃ KOD-211B RMB 4600 定点突变导入试剂盒 20次 -20℃ SMK-101 RMB 1500 KOD用TA克隆试剂盒 10次 -20℃ TAK-201 RMB 380 KOD -Plus-用Buffer 1ml -20℃ KOD-2B RMB 50 KOD -Plus-用MgSO4 1ml -20℃ KOD-2S RMB 50 KOD -Plus- Ver.2用Buffer 1ml -20℃ KOD-3B RMB 50
酶的标准使用量为50μl反应体系1U。延伸反应在68℃条件下进行,按1kb目的片段1min.的标准。出现拖尾条带时,可降低MgSO4浓度,无法确认到扩增时,可提高MgSO4浓度。
●GC-rich模板的情况
在反应液中添加终浓度为2?5%的DMSO可得到改善。
●以RT反应液为模板的情况
过量带入RT反应液有可能会对PCR反应产生抑制作用。建议带入到PCR的RT反应液在PCR反应液的1/25以下(在1/50以下)。这样就无需考虑RT反应液中Mg2+、dNTPs的影响,只要按照基本反应条件添加本酶中添付的dNTPs和MgSO4即可。
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TArget Clone-Plus-