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大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群测试片

1.适用范围：适用于各种水样中大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的快速检验

2.方法原理：耐热大肠菌群（thermotoletant coliform  bacteria）是总大肠菌群的一部分．将培养温度提高到44～45℃，在此条件下仍能生长和发酵乳糖的菌群被称为耐热大肠菌群。它们由埃希氏菌属以及克雷伯菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属中的一些菌种组成。其中大肠埃希氏菌（E.coli） 是zui准确和专一的粪便污染指示菌。与总大肠菌群相比，耐热大肠菌群在水体中的检出，说明水体更为不清洁，存在肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。大肠埃希氏菌耐热大肠菌群测试片运用酶底物技术，含有大肠埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶（glucuronidase）的显色底物（XGLUC/blue），以及耐热大肠菌群半乳糖苷酶（galactosidase）的显色底物（SalmonGal/red）, 经过44.5℃培养后，大肠埃希氏菌显紫蓝色，红色或紫蓝色菌斑都属耐热大肠菌群。
3 操作方法

3.1对于大肠菌群检验显示阳性的纸片或产酸产气的发酵管，用接种环挑取菌液，转入2－3mL无菌水中混匀，用灭菌吸管吸取1mL慢慢均匀地滴加到大肠埃希氏菌耐热大肠菌群测试片上，然后放下上层膜，静置5 min使培养基凝固，zui后用手轻轻地压一下。

3.2将接种好的纸片平放于培养箱中，44.5℃培养15～24h观察结果。

4 结果判读: 测试片上出现红色或紫蓝色菌斑都是耐热大肠菌群阳性，其中紫蓝色为大肠埃希氏菌阳性。没有红色或紫蓝色斑点为阴性结果。

致病菌检测试剂盒使用说明

1适用范围：适用于生活饮用水、水源水及食品中致病性沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、致泻大肠埃希氏菌（含肠出血性大肠杆菌O157:H7）、腊样芽孢杆菌、板奇肠杆菌检测的检测以及大肠菌群污染程度的检测。

2方法原理：依据国标GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技术将相对应培养基包被在试剂盒底部，随时取用。

3样品稀释：同国标法。液体样品取原液。固体或半固体样品用灭菌生理盐水配制成1:10和1:100的稀释液。

4 致病菌检测

4.1加样：用灭菌吸管吸取原液或1:10样品稀释液4ml～10 ml（不得少于4ml）分别加入到标号为1、2、3、A、B、C的增菌格（孔）内。加样后的1、2、3号分别为副溶血弧菌、致泻大肠埃希菌、板奇肠杆菌增菌液；A、B、C分别为金黄色葡萄球菌、沙门菌、腊样芽孢杆菌增菌液。

4.2培养：将加样后的试剂盒盖上盖，平放在36℃±1℃培养箱内培养18小时。

4.3 观察结果：如果某致病菌的增菌液发生浑浊，即预示含有此种致病菌。可按国标法进一步检测。也可取阳性菌液1mL，加入到含有9 mL灭菌生理盐的试管内，混匀，取1mL，接种到相对应的测试片上，36℃±1℃培养18小时加以验证。

5大肠菌检测

5.1加样：将试剂盒放在试验台面上，打开盒盖，用灭菌吸管分别吸取3个原液或1:10样品稀释液1ml加到标号为4、5、6的小培养基孔内。另用灭菌吸管分别吸取3个1:10或1:100的样品稀释液1ml加到标号为7、8、9的小培养基孔内，标号为10的小培养基孔内可加入1ml灭菌生理盐水作为培养基阴性对照孔使用。

5.2排气泡：加样后集气窗内如有气泡存在，可将试剂盒以30～45度角倾斜使气泡排出，必要时可轻轻用力在桌面上敲击数下排出气泡。

5.3培养：将加样后的试剂盒盖上盖，平放在36℃±1℃培养箱内培养18～24小时。

5.4观察结果：样液变为黄色为产酸、集气窗中有气泡为产气，产酸产气者为阳性结果，阳性结果的孔数越多，说明污染越严重。

6 注意事项

6.1致病菌检测与大肠菌检测可同时进行；加入样品后不需摇匀；大肠菌检测培养前一定要排气泡，排气泡的方法与结果观察可参见www.bjzw.com中大肠菌试剂盒使用说明中的图像显示；在培养箱中取试剂盒时注意平托出来，避免由于试剂盒的倾斜使大肠菌阳性集气窗中的气泡流失而影响结果判断。

6.2试剂盒为一次性无菌包装用品，供一次性即开即用，。

7 保存条件和有效期：避光保存于阴凉干燥处，*温度为2～8℃，有效期18个月。

 沙门氏菌测试片使用说明

1适用范围及原理：适用于生活饮用水、水源水及食品等中沙门氏菌的检测以及突发事件应急需要。沙门氏菌属肠道细菌科，包括那些引起食物中毒、导致肠胃炎、伤寒和副伤寒的细菌。能引起食物传播性疾病，近年来，已经成为zui常见的食物中毒原因。肠炎沙门氏菌感染通常源于奶制品、禽产品和肉产品；鸡肉和鸡蛋尤其是高风险食品。沙门氏菌感染的症状通常是肠胃出现问题，包括恶心、腹部绞痛、呕吐和腹泻，一般zui多持续7天。在免疫力低下的人群中，如果不及时服用抗生素类药品，沙门氏菌感染将导致生命危险。沙门氏菌测试片（Salmonella Count Plate BS205）含有选择性培养基、沙门氏菌*辛酯酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15-24h就可确认是否带有沙门氏菌。

2  操作方法

2.1 样品处理：生活饮用水及其水源水取原液。其他样品取 25g（mL）放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液。

2.2 接种：将沙门氏菌测试片（BS205）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置5 min使培养基凝固，zui后用手轻轻地压一下，每个样品接种两片。

2.3 培养： 将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。

3 结果判读: 对测试片进行观察，呈紫红色的菌落为沙门氏菌；呈蓝色的菌落为其他菌群。出现阳性菌落的样本，用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的话至少再取样重复检验一次。

4 附加说明

4.1有关验证试验表明，接纯菌种（包括硫化氢阴性菌株）可以产生典型的紫红色菌斑，其他肠杆菌呈蓝色，葡萄球菌不生长。

4.2测试片具有较强的敏感性，在1.5×10^-8稀释时仍可计算出菌落。临床实际应用结果显示阳性检出率高于分离培养法1.84‰，复查准确率提高约13.0%（中国卫生检验杂志2006,16（8）：954-955.）。

4.3注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。

金黄色葡萄球菌测试片使用说明

1适用范围及原理：适用于生活饮用水、水源水及食品等中金黄色葡萄球菌的检测以及突发事件应急需要。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus简称金葡菌）是人类zui常见的致病菌之一，其侵袭力很强，能产生多种致病物质如：肠毒素、凝固酶等；可引起化脓性炎症、毒素性疾病及葡萄球菌性肠炎。金葡菌所引起的中毒事件已成为世界性的公共卫生问题，我国每年由金葡菌引起的食物中毒事件屡有报道。金黄色葡萄球菌测试片（Staph Count Plate BT206）含有选择性培养基和专一性的酶显色剂，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15-24h就可确定出病原菌的存在。

2  操作方法

2.1 样品处理：：生活饮用水及其水源水取原液。其他样品取 25g（mL）放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液。

2.2 接种：将金黄色葡萄球菌测试片（BT206）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置5 min使培养基凝固，zui后用手轻轻地压一下，每个样品接种两片。

36℃±1℃，培养15～24h。

3 结果判读: 紫红色的菌落为金黄色葡萄球菌；呈蓝色的菌落为其他大肠菌群。出现阳性菌落的样本，用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的话至少再取样重复检验一次。

4 附加说明

4.1有关验证试验表明，金黄色葡萄球菌测试片接纯菌种可以产生典型的紫红色菌斑，普通大肠杆菌呈蓝色菌落，而沙门氏菌，变形杆菌在测试片上不生长。测试片的敏感度为1.2×10^-8。通过检测211份糕点、熟肉、鲜肉和奶制品样品，测试片法和国标法的阳性率分别为10.43％和7.58％（中国卫生检验杂志2007，17（8）：1456－1457.）。

4.2山东省疾病预防控制中心的验证结果表明，当金黄色葡萄球菌在0～9个菌落范围内时，测试片与血平板均能检出，作为致病菌不得捡出的标准要求，可以作为金黄色葡萄球菌检验应用。

4.3注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。

副溶血弧菌测试片使用说明

1适用范围及原理：适用于生活饮用水、水源水及食品等中副溶血弧菌的检测以及突发事件应急需要。副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种广泛分布于海洋与盐湖中的嗜盐性细菌，海产品中常有此菌，它是引起食源性疾病的主要病原之一，是夏、秋季沿海地区食物中毒和急性腹泻的重要病原。据国家食源性疾病监测网统计，我国近年由副溶血弧菌引起的食物中毒呈显著上升趋势，已成为我国一个严重的食源性公共卫生问题之一。该菌引起的食物中毒临床上表现为：上腹部疼痛、腹泻、恶心、呕吐、发热等，腹泻多为水样便，亦有大便脓血，随后腹部剧烈疼痛，持续1-2天。副溶血弧菌测试片（BH209）是一种商品化的一次性培养基产品，含有高选择性培养基、吸水凝胶和特异酶指示剂等重要成分，培养15～24小时就可确认是否有病原菌的存在。

2  操作方法

2.1 样品处理：：生活饮用水及其水源水取原液。其他样品取 25g（mL）放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液。

2.2 接种：将副溶血弧菌测试片（BH209）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置5 min使培养基凝固，zui后用手轻轻地压一下，每个样品接种两片。

2.3 培养： 将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。

3 结果判读: 呈紫红色的菌落为副溶血弧菌。多数非目的菌在测试片上不生长，少数能生长，如创伤弧菌和霍乱弧菌，但菌落呈蓝色，明显区别于目的菌。出现阳性菌落的样本，用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的话至少再取样重复检验一次。

4 附加说明

4.1 汕头出入境检验检疫局技术中心的对比试验结果表明，副溶血弧菌测试片具有较高的检测灵敏度和准确性，对纯菌的检测灵敏度达到8cfu/mL，与SN标准方法符合率达到90%以上。

4.2 注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。