用*的预装于电击杯的方式提供感受态细胞可 以zui大程度地简化电击过程的繁琐步骤。EasyShock 10B 感受态细胞由0.1cm 电击杯和20 µl of EP-Max 10B 电击组成。优点包括:
- 操作过程简化:只有一个加样步骤,无需其他小管
- 转化效率:>1 x 108 CFU/反应( 足够量DNA ), 0.5-1.5 x 1010 CFU/µg pUC19 DNA
- 包装完善紧凑:节约冷冻空间
另外,EasyShock 10B 具备所有EP-Max 10B 电击的优点
- 通过lacZΔM15 基因的alpha互补进行蓝白斑筛选
- 限制性系统突变用于克隆甲基化DNA
- 可以用于大片断插入质粒构建(zui大到37Kb)
EasyShock 10B 中使用的EP-Max 10B 电击。
使用EasyShock 10B 与普通操作步骤的比较
EasyShock 操作步骤 | 普通操作步骤 |
1. 在冰上解冻 | 1. 在冰上预冷电击杯和小管 |
2. 将DNA 加入细胞中混合 | 2. 在冰上解冻 |
3. 电击 | 3. 将细胞转移到预冷的小管 |
4. 加入SOC 培养基并铺板 | 4. 将DNA 加入细胞中混合 |
| 5. 转移悬浮液至电击杯 |
| 6. 电击 |
| 7. 加入SOC 培养基并铺板 |
Bio-Rad 提供以下5 种E.coli,包括化学和电、用于ssDNA 合成的F" 细胞和T1 噬菌体抗性细胞:
- EP-Max10B
- EP-Max10B F"
- EP-Max10B 抗T1
- C-Max 5alpha
- C-Max5alpha F"
【技术指标】
受体细胞选择指南 | EP-Max10B | EP-Max10B F" | EP-Max10B 抗T1 | C-Max5alpha | C-Max5alpha F" | 转化效率 cfu*/µg pUC19 DNA | >1 x 1010 | >1 x 1010 | >1 x 1010 | >1 x 109 | >1 x 109 | 用于克隆甲基化DNA 的 mrr, hsdRMS, mcrBC | 有 | 有 | 有 | 无 | 无 | cDNA 克隆 | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 | 用于ssDNA 合成的F" 基因 | 无 | 有 | 无 | 无 | 有 | 用于蓝/白筛选的lacZ∆M15 | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 | 用于调控表达的lacIq | 无 | 有 | 无 | 无 | 有 | 噬菌体展示 | 无 | 无 | 无 | 无 | 有 | 用于减少重组的recA | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 | 用于高质量质粒制备的endA | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 | 抗噬菌体感染的tonA | 无 | 无 | 有 | 无 | 无 | * 菌落形成单位 Bio-Rad 基因型 细胞类型 | 转化方法 | 表型 | EP-Max10B | 电穿孔 | F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 deoR recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galU galKrpsL nupG λ– | EP-Max10B 抗T1 | 电穿孔 | F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 deoR recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galU galKrpsL nupG λ– tonA | EP-Max10B F" | 电穿孔 | mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 deoR recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galU galK rpsL nupG λ–/F"[lacIqZ∆M15 Tn10 (Tetr)] | C-Max5alpha | 热击 | F – φ80dlacZ∆M15 ∆(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk–, mk+) phoA supE44 λ– thi-1 gyrA96 relA1 | C-Max5alpha F" | 热击 | φ80dlacZ∆M15 ∆(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk–, mk+) phoA supE44 λ– thi-1 gyrA96 relA1/F"[lacIq Tn10 (Tetr)] | |