【产品简介】

　　非洲猪瘟病毒荧光PCR试剂盒基于硅胶吸附柱核酸纯化技术，适用样本为全血、血清和拭子(包括、口腔拭子、环境取样拭子等)，仅需裂解-过柱-洗涤-洗脱四个步骤即可获得高浓度、高纯度的DNA，无蛋白质污染。本试剂盒提取效率高，质量稳定可靠，操作方便、快捷。

　　用户需自备的试剂为无水乙醇或95%以上的科研酒精。

　　非洲猪瘟病毒荧光PCR试剂盒【产品内容】

　　产品组成规格使用说明

　　溶液1-蛋白酶K1 mL

　　溶液222 mL

　　溶液310 mL使用前加入15mL无水乙醇

　　溶液45 mL使用前加入20mL无水乙醇

　　溶液54 mL

　　DNA吸附柱50支

　　收集管2mL50支

　　离心管 1.5mL50支

　　【使用前注意事项】

　　1. 溶液3在使用前需加入15mL无水乙醇并充分混匀。

　　2. 溶液4在使用前需加入20mL无水乙醇并充分混匀。

　　3. 需自备若干离心管，本试剂盒提供的50支1.5mL离心管仅用于收集提取的DNA溶液。

　　4. 以下操作如非指明，均在室温下进行。

　　5. 本试剂盒赠送1支15mL的量取乙醇用管，所有使用无水乙醇的步骤均可用95%以上的科研酒精替代。

　　6. 离心机于8000 rpm运行时，离心力应大于1400g;使用掌上离心机时，需将离心时间延长至1min。

　　【操作步骤】

　　1. 全血、血清样本：在1.5mL离心管中加入200μL样本。

　　拭子样本： 将1个拭子置于离心管中，加入400μL无菌生理盐水，充分涡旋后，取200μL溶液置于1.5mL离心管中。

　　2. 加入20μL蛋白酶K，涡旋或颠倒混合均匀，56℃孵育10min。(无加热设备的情况下可于室温静置孵育15min)

　　3. 加入400μL溶液2，涡旋或颠倒混合均匀，56℃孵育5min。(无加热设备的情况下可于室温静置孵育5min)

　　注意：当样本为全血时，静置5min后请于12000rpm离心2min，吸取上清至另一离心管。不产生沉淀的血清和拭子样本可省略离心步骤。

　　4. 加入200μL无水乙醇，涡旋或颠倒混合均匀。

　　5. 将DNA吸附柱置于收集管中，将上述溶液全转移到DNA吸附柱中，8,000 rpm离心30s，弃滤液。

　　6. 向DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液3，8,000 rpm离心30s，弃滤液。

　　注意：初次使用前需向溶液3瓶中加入15mL的无水乙醇，并充分振荡混匀。

　　7. 将DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液4，8,000 rpm离心30s，弃滤液。

　　注意：初次使用前需向溶液4瓶中加入20mL的无水乙醇，并充分振荡混匀。

　　8. 将DNA吸附柱重新放回收集管中，8,000 rpm空转离心30s，弃滤液。将吸附柱打开置于室温5分钟，以晾干。

　　注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。

　　9. 将DNA吸附柱置于新的1.5mL离心管中， 向吸附柱柱膜上方小心加入50μL 溶液5(此步骤请谨慎操作，枪头请勿接触柱膜)，8,000 rpm离心30s，洗脱液即为DNA溶液。

　　注意：洗脱体积不应少于30μL，体积过小影响回收效率。DNA溶液请置于-20℃冰箱中保存，避免反复冻融。

　　【规格】 50次/盒

　　【贮藏及有效期】室温(15-25℃)保存，有效期12个月。