【概要】

　　赭曲霉毒素A (Ochratoxin A)是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物，属烈性的shen脏毒和gan脏毒，广泛存在于各种食物中，谷物及其副产品是赭曲霉毒素A的主要来源。动物实验表明摄入了被这种毒素污染的饲料后，会发生急性或慢性中毒症。防止污染赭曲霉毒素A的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链，加强对赭曲霉毒素A的检测十分重要。

　　【适用范围及性能】

　　用于定性、定量检测谷物、酒类、中药等食品和饲料等样本中的赭曲霉毒素A时的样品前处理。

　　柱容量：≥200ng

　　回收率：≥90%

　　【试验原理】

　　本产品的测定的基础是抗原抗体反应，赭曲霉毒素A单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的赭曲霉毒素A经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过赭曲霉毒素A免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，赭曲霉毒素A与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱赭曲霉毒素A，然后注入到分析仪器中用于检测。

　　【包装组成】

　　根据不同规格，每一个盒中包含5/25支赭曲霉毒素A免疫亲和层析柱及1份说明书。

　　【需要而未提供的设备及试剂】

　　设备：

　　1. 高速均质器或组织匀浆机

　　2. 粉碎机

　　3. 200mL/50mL量筒

　　4. 天平：感量0.1g

　　5. 微量移液器：单道 100mL～1000mL

　　6. 槽纹滤纸(折叠快速定性或定量滤纸)

　　7. 玻璃微纤维滤纸(1.5mm孔径)

　　8. 50mL漏斗

　　9. 一次性玻璃试管

　　10. 泵流操作架(包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等)

　　试剂：

　　1. 甲醇(色谱级)

　　2. 乙酸(分析纯，色谱级)

　　3. 蒸馏水或去离子水

　　4. pH7.0磷酸盐缓冲溶液(PBS缓冲液)：称取8.0g氯化钠，1.2g*，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯hua钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，后用纯水稀释至1000mL

　　5. 样品提取液：配制甲醇-水(8：2)溶液作为样品提取液

　　洗脱液：配制甲醇-乙酸(99：1)溶液作为洗脱液

　　【试剂配制】

　　样品提取液：配制甲醇-水(8：2)溶液作为样品提取液

　　洗脱液：配制甲醇-乙酸(99：1)溶液作为洗脱液

　　【样本处理步骤】

　　(一)花生，玉米，大米，小麦及其制品和饲料(稀释倍数2.5)

　　1. 称取20g粉碎的样品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯化钠，以甲醇-水(8：2)溶液定容至100mL;

　　2. 转移到均质杯中，以均质器高速搅拌，提取2min;

　　3. 4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤;

　　4. 取10mL滤液并加入40mLPBS缓冲液稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待测;

　　5. 将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;

　　6. 将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/S流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体;

　　7. 以10.0mL清洗缓冲液淋洗柱子1次，流速为1-2滴/S，弃去全部流出液;

　　8. 再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速为1-2滴/S，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体;

　　9. 准确加入1.0mL洗脱液洗脱，流速为1 滴/S，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。

　　(二)啤酒，黄酒等酒类(稀释倍数1)

　　1. 取10mL试样脱气后与90mLPBS缓冲液混匀，用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待测;

　　2. 将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;

　　3. 将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/S流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2mL~3mL空气通过柱体;

　　4. 以10.0mL清洗缓冲液淋洗柱子1次，流速为1-2滴/S，弃去全部流出液;

　　5. 再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速为1-2滴/S，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体;

　　6. 准确加入1.0mL洗脱液洗脱，流速为1 滴/S，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。

　　【结果判定】

　　经免疫亲和柱净化后，收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测，也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。

　　【注意事项】

　　1. 赭曲霉毒素危害*，应戴手套操作;

　　2. 不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

　　3. 洗脱液可以直接使用色谱级甲醇洗脱，但会降低回收率。

　　【贮藏条件及保存期】

　　贮藏条件：亲和柱可于常温保存，2-8℃储存可延长有效期，不可冻存;

　　保存期：该产品有效期为12个月。