【产品用途】

　　呕吐毒素(DON)免疫亲和柱适合于和DON酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测DON。适用于谷物、饲料等样本中的DON净化处理，提高了样品的纯度，纯化后的提取液可用不同的分析方法测定。

　　【测定原理】

　　本产品测定的基础是抗原抗体反应，呕吐毒素(DON)单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的DON经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过DON免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，DON与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。后采用甲醇洗脱DON，然后进行相关分析。

　　【样品制备及净化】

　　----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5g聚乙二醇8000，并与125mL水混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，

　　----用快速定性滤纸过滤，并用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。

　　【亲和柱净化】

　　注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!

　　----将柱子上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上;

　　----将20mL注射器连接于免疫亲和柱上部，用5~10mL pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)或者去离子水平衡柱子，以1滴/秒的速度缓慢通过免疫亲和柱，(用注射器加以正压或用真空泵施加负压，也可以使用泵流操作架配合免疫亲和柱);

　　----准确移取2mL上述滤液(相当于0.4g样品)注入注射器中，调节针筒压力使其以1滴/2秒的速度缓慢通过免疫亲和柱;

　　----用20mL 水冲洗柱子，弃去流出液，流速1滴/秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体;

　　----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速1滴/2~3秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液，可根据实际测定条件进行稀释或氮气吹干后流动相定容，再进行相关测定。

　　【注意事项】

　　(1)呕吐毒素对人体有害，应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次氯酸钠浸泡过夜。

　　(2)不要使用过有效期的免疫亲和柱。

　　(3)免疫亲和柱应在2~8℃保存。不要冷冻。

　　(4)使用前，免疫亲和柱需至少提前半小时回温至室温(25℃左右)。

　　(5)HPLC液相测定值、试剂盒计算值接近zui高检出值时，样本的实际含量可能大于柱容量而造成流穿，建议减少上样体积重新过柱。

　　(6)称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议低不少于10g样。

　　温馨提示：不可用于临床治疗。