液相色谱仪溶剂的选择与优化——紫外截止波长
时间:2015-12-26 阅读:107
由于液相色谱仪应用zui多的检测器是紫外检测器,用于检测具有紫外吸收的样品。紫外检测器灵敏度高,不破坏样品,能与其他检测器有串联,也可用于制备;对温度及流动相流速波动不敏感,可用于梯度洗脱。但只能检测具有π-π或p-π共轭结构的化合物。
使用紫外检测器时应考虑溶剂的截止波长。例如,当检测波长为220nm时,只能选用小于此截止波长的溶剂,如正戊烷、水、甲醇、乙腈等溶剂,而不能用截止波长小于220nm的溶剂,如二氯甲烷、氯仿等。
紫外截止波长定义为:“以空气作为参考物,在1cm 吸收池内溶剂测得与参照物相等吸收的吸收波长”。
当某溶剂在流动相中占较小比例时则应根据具体情况决定。如浓度为10%(体积分数)或更低的溶液在截止波长附近检测仅会有一个0.1AU(吸收单位)的背景吸收。除了随之产生的噪声水平增加,线性工作范围减小和稳定性变差外,多数情况是可以接受的。
应该值得重视的是,不同液相色谱仪厂家不同批号溶剂的光谱特性可能存在明显的差异。由于杂质种类和含量的区别,紫外截止波长及吸收系数都会有差异。空气中氧气溶解量的区别会明显产生不同的基线噪声。因此,除了尽可能使用符合色谱标准的溶剂外,液相色谱仪的溶剂使用前应该仔细过滤,用超声脱气,甚至用吹氦气的方法处理,以尽量去除杂质以及可挥发的溶解气体。