程：       

黄曲霉毒素

B1

（

AFB1

）酶联免疫定量检测试剂盒使用说明

本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定谷物中

AFB

1

。该测试盒反应孔可拆卸，可测单份样品，也可测多份样品。定量分析时需有含

450nm

波长的微孔板酶标仪。

1 

概要

黄曲霉毒素是由曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉等产生的次级代谢产物，主要污染玉米、花生、坚果等。天然污染的黄曲霉毒素以

AFB

1

为主，

AFB

1

属于强烈致癌物质，肝脏是其主要的靶器官，具有*的急性毒性和致癌性。

AFB

1

检测方法主要有薄层色谱法（

TLC

）、高效液相色谱法（

HPLC

）和

ELISA

方法，本试剂盒是以应用单克隆抗体为基础的

ELISA

检测方法，可以准确快速检测粮谷类和花生及饲料中的

AFB

1

。

2 

测定原理

本试剂盒采用固相酶联免疫吸附原理，利用间接竞争

ELISA

法进行测定。用抗原包被微孔板，加入

AFB

1

标准品或样品、抗

AFB

1

单克隆抗体进行孵育后，将未与包被抗原结合的抗体洗去；再加入酶标记的抗鼠

IgG

抗体孵育，加入显色液，经过终止液终止后，用酶标仪在

450nm

处测定

OD

值。

3 

提供的物品

----

微孔板

…………………………………………………………… 

包被有

AFB

1

-BSA

----

5

个浓度的

AFB

1

标准溶液（各

0.5mL

）

标准

1

：

0ng/mL…………………………………………………………….

直接使用

标准

2

：

0.1ng/m…………………………………………………………….

直接使用

标准

3

：

0.2ng/mL ………………………………………………………….

直接使用

标准

4

：

0.5ng/m………………………………………………….…………

直接使用

标准

5

：

1.0ng/m………………………………………….…………………

直接使用

----

抗

AF B

1

单克隆抗体溶液

（6mL）……………………………………………

直接使用

----

酶标物

（12mL）..………………………………………………………………

直接使用

----

显色液

（12mL）..………………………………………………………………

直接使用

----

终止液

（6mL）…………………………………………………………………

直接使用

----

浓缩洗液

（30mL）..……………………………………………………………

稀释使用

4 

盒中未提供，需自备物品

----

微孔板酶标仪（可于

450nm

处

测定）、振荡器、粉碎机、微量移液器

----

量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸

----

氯化钠（分析纯）、甲醇（分析纯）、

去离子水或蒸馏水

5 

操作者注意事项

       ----

标准溶液中含有黄曲霉毒素，应特别小心。

----

使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用

pH7

的次氯酸溶液（

10%v/v

）浸泡过夜。

----

终止液含有liu酸，避免接触皮肤。

----

每次加样后立即将所有试剂放回

2

~

8

℃

。

----

每步加样时间应控制在

5min

内。

----

孵育过程中应避光。

----

不要使用过期试剂盒。

       ----

不要交叉使用不同批号的试剂盒中的试剂。

6 

储存条件

       ----

保存试剂盒于

2~

8

℃

。

不要冷冻

.

       ----

显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

       ----

将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置

2~

8

℃

保存

。

7 

试剂变质的标志

       ----

标准

1

的吸光度值小于

0.5

个单位

（

A

450nm

<0.5

）

时，表示试剂可能变质。

8 

样品处理

----

样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存。

----

取

5g

粉碎的有代表性的样品，加

1.25g

氯化钠及

25mL70%

甲醇

-

水

溶液

。

----

强力振荡

3

分钟。

----

用快速定性滤纸过滤。

----

取

1mL

滤液，加

水

4

mL

进行

稀释。

----

取

50μL

稀释液进行分析。

----*

根据需要可以增减样品量，但甲醇

-

水

溶液的量也应相应增减

。