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检测巨细胞病毒抗体IgM(CMVAb-IgM)

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2010/9/13 8:45:18

 

检测巨细胞病毒抗体IgM(CMVAb-IgM)
 
    [测定方法ELISA
    [方法学原理在微孔表面包被纯化的巨细胞病毒抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在巨细胞病毒抗体—IgM可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质,再加入酶联液,与抗原抗体复合物结合。洗去过量的酶联液。zui后加入底物和色原显色液。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中巨细胞病毒抗体-IgM含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比,读出结果。
    [标本准备静脉抽血2ml,不抗凝。
    [试剂]
    1.微孔板
    2.样品稀释液
    3HRP-抗人IgM酶结合物
    4.阴性对照
    5.阳性对照
    6.洗涤剂
    7TMB显色液
    8.终止液
    [仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
    [测定步骤]
    1.吸取10ul血清标本加入25091标本稀释液中,做126稀释。
    2.吸取100ul稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液不稀释,加入微孔板内,设空白对照1孔。振荡,混匀,去除孔内液体中气泡,室温环境中孵育20min
    3.弃去孔内液体,用洗涤液洗5次。
    4.每孔再加入100~1酶联结合物,室温环境中孵育20min
    5.弃去孔中酶联液,用洗涤液洗5次。
    6.每孔加人100ul TMB显色液,室温环境中孵育10min   
    7.每孔加入100gl终止液,终止反应,充分混匀。
    8.用酶标仪波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。
    [注意事项]
    1.整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定,严防交叉污染。
    2.所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
    3.试剂应保存于28冰箱,使用前应在室温环境中平衡30min 
    4.洗涤时各孔均应加满洗涤液,防止孔内有游离酶未洗净,每次洗板后均应在吸水纸上拍干。
    5.血标本应分离出血清保存,28可保存7d,冷冻保存可至6个月,避免反复冻融。
    6.试剂在储存或使用过程中,禁止过热、曝晒或强光。

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