高压蒸汽灭菌器操作较为简单，基本的操作都大同小异。
1.准备
在将灭菌器械放前，在将灭菌器械放入灭菌器之前，请您先将其清洗干净，以避免灭菌器械上的残留物质对灭菌器本身以及灭菌器械产生危害。
2.升温
按启动键，灭菌器进入升温行程。
2.1升温指示灯亮（注意：必须高水位灯亮时才能加热）。
2.2上排数码管显示内室温度，下排数码管显示排冷气温度。
2.3电热管通电，内室开始升温。同时冷空气通过排汽阀排放。
2.4当内室温度到达设定的置换温度（即设置好的排冷气温度）时，排汽阀关闭，电热管继续加热。上排数码管显示内室温度，下排数码管显示灭菌时间的数值。(来源：鑫贝西实验室仪器专家)
3. 灭菌
当内室温度到达设定的灭菌温度时，开始灭菌计时，计时以秒为单位递减。
4.结束
当灭菌时间递减为0，转入结束。内室开始排汽，温度下降，当内室温度降至102℃，蜂鸣器鸣叫表示灭菌结束。压力表指针回复“0”位时，稍等一分钟，即可取出灭菌物品。
注意事项：
长时间灭菌一定保证不能发生漏气现象，一旦发生漏气现象锅体内的水份会逐渐减少，zui终可能导致烧干锅的情况，会发生危险。不漏气的情况下温度达到100度排气阀就会关闭，所以锅体内水份不会减少也就不会发生危险。所以，在使用过程中如果发生漏气现象需紧急切断电源，保证安全。