庆大霉素快检试剂盒

庆大霉素快检试剂盒

使用说明书

1、原理
微孔板用羊抗兔抗体IgG包被。特异性抗体（兔抗庆大霉素），庆大霉素标记的酶（酶结合物）和庆大霉素标准品或应聘被加入到微孔后，特异性抗体被牢固地集合在板条上的羊抗兔抗体IgG上，同时，游离的庆大霉素（在标准溶液或样品中）和酶结合物与特异性抗体竞争性结合。孵育后，在洗涤步骤中除去非结合（酶标记）试剂。加入色原底物（四甲基联苯胺），结合的酶结合物可将无色的色原转化成为有色色产物。加入硫酸，终止底物反映，在450nm波长检测吸光值，与样品中的庆大霉素浓度成反比。
2、产品简介
本试剂盒包含EIA测试所需试剂和标准品，可进行96样测试，用于牛奶、组织、血清、尿样、蛋类、蜂蜜和饲料样品中中庆大霉素的筛检。
庆大霉素是一种氨基糖苷类抗生素。氨基糖苷类抗生素引起人类和动物前庭功能障碍和耳听力损害。氨基糖苷类抗生素具有抗细菌及抗真菌作用，可用于治疗革兰氏阴性菌引起的严重感染，因此仍在广泛使用。但氨基糖苷类抗生素的治疗剂量及中毒剂量较为接近，其使用剂量必须收到监控。人类在饲养过程中为防止奶牛间疾病的传染、避免禽类消化器官和呼吸道疾病的爆发有意或无意使用的氨基糖苷类抗生素从而在动物器官中产生了氨基糖苷类抗生素的残留。
3、灵敏度和交叉反应
交叉反应
庆大霉素 100% 紫苏霉素 20% 妥布霉素 <0.1%
新霉素 <0.1% 卡那霉素 <0.1% 林可霉素 <0.5%
灵敏度：测试曲线线性范围0.1～-8.1ng/ml 

庆大霉素检测试剂盒检测下限：
样品 处理方法 检测下限
牛奶 脱脂稀释 2ppb
组织 三氯yi酸提取 3ppb
血清 缓冲液稀释 2 ppb
蛋类 缓冲液稀释 1 ppb
蜂蜜（稀释法） 缓冲液稀释 3 ppb
蜂蜜（抽提法） 固相抽提 0.5 ppb
尿样 缓冲液稀释 2 ppb
饲料 三氯yi酸提取 2 ppb 

4、试剂盒保存
2-8℃暗处保存
使用前应先将试剂平衡至室温，再重组或稀释试剂盒组分。
应避免阳光对色原底物溶液的直接照射。
若观察到下列现象，便说明试剂已发生降解:
色原溶液在诸如反应孔以前变蓝。
z高结合时颜色反应微弱或缺如。（零标准，E450 nm<0.8）
 
5、庆大霉素检测试剂盒试剂盒组分
96孔酶标版（12条*8孔）预包被抗体，无需洗涤
样品稀释液：20ml，50倍浓缩
洗涤缓冲液：50ml，20倍浓缩
底物溶液缓冲液A：7ml，即时可用
底物溶液B：7ml，即时可用
终止液：7ml，即时可用
酶结合物溶液：7ml，即时可用 
6瓶庆大霉素标准溶液：各1ml，浓度为0、0.1、0.3、0.9、2.7和8.1ng/ml
检测所需设备和材料：
酶标仪（450nm）：冷冻离心机；混合振荡器；移液器；匀质器；微量移液器（20-200ul,100-1000ul）;移液器（205ml）；天平、量筒、塑料检测管、铝箔或封口膜 

6、注意事项
终止溶液含硫酸，切勿接触皮肤。
全部生物材料匀应避免接触皮肤和粘膜。
底物TMB在接触皮肤和吞入时有吸入毒性，在处理此种底物时应小心谨慎。
不得失效期后的试剂盒组分，也不得混合使用不同批次的组分。
各板孔z后均用于测定光学曲线，应防止孔底内外遭受污损。
全部组分均在使用前*溶解，应特别注意底物，此化合物可在4℃时结晶。 

7、样品处理
7.1 牛奶
2000g，4℃离心10min
去除上层脂肪
讲脱脂奶样用样品稀释液10被系数，充分混匀，调ph值为7.4±0.4
吸取50ul用于检测。
7.2 组织
取1g均质组织样品（肉，肝或肾），加入3ml 3%的三氯yi酸，均质1min，颠倒混匀样品30min;
离心（2000g,4℃ 10min）；
除去上层脂肪,吸取200ul清液，加入800ul样品稀释液，混匀；
调整PH值到7.4±0.4；
吸取50ul用于检测。
7.3 血清
血清用样品稀释液稀释20倍后使用
吸取50ul用于检测
7.4蜂蜜
7.4.1 缓冲液稀释
城区1g均质的蜂蜜样品于塑料试管中
加4ml样品稀释液，涡旋混合均匀
静置一会分层，吸取1ml上层干净液体加到4ml样品稀释液中，涡旋混合均匀。
吸取50ul用于检测
7.4.2 抽提法
1g蜂蜜样品中加9ml抽提缓冲液
室温下混合10min，离心（2000g,10min）
Sep-pakC18柱（water公司，05910）依次用10ml去离子水、5ml甲醇、10ml去离子水活化柱子。
将5ml样品上清液过柱，用5ml去离子水洗涤柱子
真空干柱
用1ml甲醇洗脱
40℃ 氮硫蒸发甲醇
样品残留物溶于5ml样品稀释液
吸取50ul用于检测
7.5 蛋类样品
均质后的全蛋、蛋白或蛋黄
吸取1ml均质后的样品到干净试管中
加9ml样品稀释液，涡旋混合均匀
吸取50ul用于检测
7.6 尿样
将尿样用样品稀释液稀释10被倍，充分混匀，调PH值为7.4±0.4
吸取50ul用于检测
7.7 饲料样品
称取1g均质的饲料样品，加5ml3%的三氯yi酸溶液，均质1min，颠倒混匀样品30min;
去掉塞子，离心 （2000g,10min）
出去上层脂肪，用过滤管吸取100ul清液（避免吸入脂肪）于塑料试管中，加入900ul样品稀释液后，混匀；
调整PH到7.4±0.4
吸取50ul用于检测 

8.庆大霉素检测试剂盒试剂制备
使用之前应先将试剂盒回复至室温20-25℃（提前15-30min从冰箱去除即可）
8.1 微孔板
剪开塑料袋，取出需用数量的微孔板及框架。将不用的微孔板条放回备有干燥机的塑料袋内，密封保存于2-8℃。
8.2洗涤缓冲液（20*浓缩）
稀释的洗涤缓冲液应在临用时现配。如：2ml浓缩的洗涤缓冲液 38ml蒸馏水
8.3 样品稀释缓冲液（10*浓缩）
稀释液应在临用时现配。如：2ml浓缩的洗涤缓冲液 18ml蒸馏水
8.4 底物溶液
使用前恢复至室温，避免阳光直射，用前充分摇匀（底物溶液在4℃
下易结晶）。
8.5 蜂蜜抽提缓冲液
10.1g（50Mm）1-庚烷磺酸（sigmaH27660）,11.4g（30mM）Na3PO4·12H2O.用去离子水定容到1升。（用Na3PO4 调PH2.0） 

9、庆大霉素检测试剂盒检测步骤（室温20-25℃下操作z佳）
9.1 将所需数量的孔条插入微孔架
9.2 每孔从底部先加入50ul标准品或已处理好的样品，再分别加入50ul酶结合物于相应孔中
9.3封板，摇板1min
9.4 37（±1℃）孵育30min
9.5 洗版：将微滴板上端朝下倒空各孔后，再平稳快速向下垂直甩动，并将微孔架倒置在吸水纸上拍打以除去孔中的液体。用洗涤缓冲液（300ul/孔）注入全部板孔，再次倒掉微孔中液体。重复上述操作3遍。如使用自动洗板机，可预定洗板完成5次周期。
9.6 将100ul混合后的底物溶液加入各孔。37℃暗处温育10min。
9.7 将50ul终止液加入各孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450nm/630nm检测），测定每孔OD值。 

10、庆大霉素检测试剂盒结果判定
1.计算各标准品（或样品）的百分吸光度值，按下式计算：
标准品或样品O.D
*100%=各标准品（或样品）吸光度值%
零标准O.D
2.绘制以各标准品庆大霉素浓度为半对数坐标系统的曲线图，即纵坐标标书标准百分吸光值，横坐标表示各标准品庆大霉素浓度（ng/ml）的对数。在含量0.1-8.1ng/g范围内标准曲线应为线性。
3.各样品浓度可根据其百分吸光度值，从标准曲线上读出，并乘以相应的稀释系数.
样品 稀释倍数 庆大霉素的实际浓度
牛奶 10 校正曲线上读出的浓度值*10
组织 20 校正曲线上读出的浓度值*20
血清 20 校正曲线上读出的浓度值*20
蛋类 10 校正曲线上读出的浓度值*10
蜂蜜（稀释法） 25 校正曲线上读出的浓度值*25
蜂蜜（抽提法） 1 校正曲线上读出的浓度值*1
尿样 10 校正曲线上读出的浓度值*10
饲料 50 校正曲线上读出的浓度值*50