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植物染色体组型和带型分析

时间:2009-12-07      阅读:1242

一、实验目的
观察分析植物细胞有丝分裂中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征,学习染色体组型分析的方法。了解和掌握不同物种染色体组型和带型分析的方法和技术,进一步鉴别染色体结构和染色体组。要求至少利用一种方法制备出一个物种的合格的染色体标本,进行组型分析或进行不同的带型,如G-带、C-带等分析。练习显微摄影的操作过程,拍摄和印放显微照片。
二、实验条件
本实验在遗传学实验室完成。遗传学实验室提供:
1、实验仪器及用具
显微镜(附摄影装置),冰箱,恒温水浴锅,电子天平,容量瓶,试剂瓶烧杯,染色缸,载玻片,盖玻片,剪刀,镊子,玻璃板,滤纸,标签,铅笔
2、药品和试剂
冰醋酸,*,甲醇,盐酸,柠檬酸钠,氢氧化钡,氯化钠,磷酸二氢钠,磷酸二氢钾,磷酸氢二钠,甘油,Giemsa粉剂,果胶酶,纤维素酶
试剂1:Giemsa液:0.5克Giemsa,33ml甘油,33ml甲醇,用少量甘油将Giemsa粉末研磨至无颗粒,剩余甘油分次洗涤至棕色瓶内,置56℃恒温2h,加入甲醇,过滤后保存于棕色瓶中。
试剂2 :5%氢氧化钡:5gBa(OH)2加入100ml沸蒸馏水中溶解后过滤,冷却至18-28℃。
试剂3:2×SSC溶液:0.3M氯化钠+0.3M柠檬酸钠。
试剂4:1M NaH2PO4溶液。
试剂5:1%纤维素酶和果胶酶混合液。
试剂6:1/15磷酸二氢钾和1/15磷酸氢二钠缓冲液。
实验室为半开放,学生可以在实验室开放时间做实验。需要购买实验材料时,经指导老师批准,确定数量和价格范围后可以购买,实报实销。
三、实验要求
1. 实验前,学生应查阅参考文献,理解本实验的目的要求,制定出本实验的设计方案,经指导老师可行性分析后,再修改、确定实验方案;
2. 将所有实验用具和试剂准备好之后才能开始实验,操作要严格规范。
3. 根据实验结果写出实验报告,并分析、讨论,得出结论。
4. 完成一种植物根尖制片和保存细胞图象。
5. 对染色体图片进行核型分析:列出测量结果、排列好核型图、绘模式图、写出核型公式。
四、实验说明
对植物有丝分裂中期染色体进行酶解,酸、碱、盐等处理,再经染色后,染色体可清楚地显示出很多条深浅、宽窄不同的染色带。各染色体上染色带的数目、部位、宽窄、深浅、相对稳定,为鉴别染色体的形态提供依据,也为细胞遗传学和染色体工程提供新的研究手段。
植物染色体显带技术包括荧光分带和Giemsa(吉姆萨)分带两大类。在植物染色体显带上zui常用的是Giemsa分带技术,其中C带和N带较为常用。C带的形成认为是高度重复序列的DNA(异染色质)经酸碱变性和复性处理后,易于复性,而低重复序列和单一序列DNA(常染色质)不复性,经Giemsa染色后呈现深浅不同的染色反应。这种差异反映染色体结构的差异。
该综合实验的特点:在实验教师的管理下,学生从种子发芽开始(实验材料可以由教师准备,学生也可自带植物种子),进行根尖预处理、固定、染色体压片操作、*片的制作、显微摄影以及染色体的鉴定和核型多态性观察,整个实验准备和操作过程均有学生独立完成。在实验过程中,启发学生创造性地改进实验方法或技术。通过这一系统的综合实验,使学生增强独立操作的能力,掌握有关实验技能,培养创新精神和独立实验工作能力。
  本实验是一个带有障碍性的实验,种子萌发时的水分、温度控制不好,预处理不充分,解离时没有严格按要求做,压片技术不过关等等,都会直接或间接地导致实验失败。学生可以在实验中充分发挥自己的主观能动性,对各步骤可以提出不同的处理方法,有利于培养其独立思考和勇于创新的能力。
五、注意事项
1. 种子萌发时的水分、温度控制
2. 预处理和解离的时间
3. 压片时尽量不要移动。

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