GUS染色液(即用型)使用说明书

【产品组成】

【保存条件】

室温避光，-20℃，6个月

【产品概述】

  GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。GUS受体基因系统有表达E.coliGUS酶的稳定性和在植物内的低活性，绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。5-Bromo-chloro-3-indolylβ-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(简称为X-Gluc或X-GlcA)分子量为521.8，CAS号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中GUS基因的底物，可快速检测植物中GUS基因融合标记。

  GUS染色液(即用型)又称β-葡萄糖苷酶基因染色试剂(-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)简称为GUS染色液，其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。GUS染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的GUS基因表达分析，该即用型试剂比常规GUS染色液操作简便。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

【使用方法】

1、配制X-Gluc溶液(50x)：取1mlX-Gluc Solution*加至1支X-Gluc中，充分溶解，即获得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x)-20℃保存，1个月有效。

2、配制X-Gluc染色液：取适量的X-Gluc溶液(50x)和GUS Buffer，按1：49比例充分混匀，配制成X-Gluc染色液，如取0.2mlX-Gluc溶液(50x)加入到9.8mlGUS Buffer中，即配成10mlGUS染色液，该染色液建议现用现配，短期贮存可以4℃保存3天。

3、取适量待染叶片等组织加入适量GUS染色液，使GUS染色液*浸没组织。

4、37℃孵育1-24h，随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。

5、用70%乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1～3h，至阴性对照呈白色。如有必要可重复该脱色步骤，以便*清除叶绿素。样本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光学显微镜下观察，白色背景上的蓝色即为GUS表达位点。

【注意事项】

1、配制好的GUS染色液可以4℃避光保存3天。

2、由于组织特异性等原因，蓝色颜色反应可能不*一致，应注意摸索具体实验条件。拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗根就可直接染色；烟草和马铃薯这些植物的茎和叶须在染色前切成薄片（1-3mm）；当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞，建议采购常规GUS染色液。