新国标应对—GB 5009.298-2023 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定
时间：2024-10-09 阅读：306
引 言
三氯蔗糖，又名蔗糖素，是一种人工合成甜味剂，以蔗糖为原料经氯代而制得，具有高甜度、低热量、安全性高、稳定性好等特点。作为低热量甜味剂或无糖替代品，三氯蔗糖被广泛应用于食品和饮料中，如无糖可乐、乳酸菌饮品、果脯蜜饯、面包饼干、糖果、坚果等。世界卫生组织 (WHO)、美国食品药品监督管理局 (FDA) 和欧洲食品安全局 (EFSA) 等权威机构对三氯蔗糖的安全性进行了评估，并确认其在规定的摄入量范围内是安全的。另外也有研究指出，三氯蔗糖可能会对肠道微生物菌群产生影响，但证据和结论尚不明确；在高温烹饪（如油炸）时，三氯蔗糖会生成少量的氯丙醇类有毒物质。
GB 2760-2024 进一步扩大三氯蔗糖的使用范围和最大使用量
2024 年 2 月 8 日，国家卫生健康委联合市场监管总局发布 47 项新食品安全国家标准和 6 项修改单[1]。时隔十年，《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准 (GB 2760)》迎来再次修订，多种常用食品添加剂调整了使用范围和最大使用量，如脱氢乙酸、三氯蔗糖等。其中在加工坚果与籽类（食品类别 04.05.02）中三氯蔗糖最大使用量为 1.0 g/kg。
2 月 29 日，国家卫生健康委发布《关于石斛原球茎等 23 种“三新食品”的公告》[2]，其中提出三氯蔗糖在带壳熟制坚果与籽类（食品类别 04.05.02.01.01）和脱壳熟制坚果与籽类（食品类别 04.05.02.01.02）中扩大使用量，最大限量分别为 4.0 g/kg 和 2.0 g/kg。
表 1 GB 2760-2024 三氯蔗糖允许使用范围以及最大使用量[4]（点击查看大图）
表 2 GB 2760-2014 三氯蔗糖允许使用范围以及最大使用量[5]（点击查看大图）
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GB 5009.298-2023 新国标变化[6] [7]
2023 年 9 月 6 日，国家卫生健康委、市场监管总局联合印发 2023 年第 6 号公告[3]，发布了 85 项食品安全国家标准，其中包含了三氯蔗糖的检测标准—GB 5009.298-2023。
1. GB 5009.298-2023 于 2023-09-06 正式发布，2024-03-06 正式实施；
2. GB 5009.298-2023 代替 GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定；
3. 相较于 GB 22255-2014，GB 5009.298-2023 增加了第二法 高效液相色谱-串联质谱法 (HPLC-MS/MS)，修改了第一法 高效液相色谱法 (HPLC-RID&ELSD) 的样品前处理流程、液相色谱条件及方法检出限和定量限。
赛默飞新国标应对方案亮点
1.针对第一法 HPLC-RID，赛默飞实验室采用 Umisil C18 (3) 色谱柱配合最新款示差检测器—VC-D60 进行方法复现，试验结果表明：三氯蔗糖 (0.10 mg/mL) 色谱峰形良好，不对称因子 1.09，柱效优异，理论塔板数 18424；方法灵敏度高，线性低点 (0.02 mg/mL) 信噪比为 83.9；线性范围 0.02-1.00 mg/mL，线性相关系数 r2≥0.9999；方法重现性和稳定性较好，方法检出限和定量限均满足标准要求。流动相须预混脱气后，单通道等度洗脱。
2.针对第一法 HPLC-ELSD，赛默飞实验室采用 Hypersil GOLD C18 色谱柱配合电雾式检测器—CAD 进行方法等效验证，试验结果表明：三氯蔗糖 (10.0 μg/mL) 色谱峰形良好，不对称因子 1.04，柱效优异，理论塔板数 18105；方法灵敏度高，线性低点 (1.00 μg/mL) 信噪比为 99.8；线性范围 1.00-50.0 μg/mL，线性相关系数 r2≥0.9999；方法检出限和定量限均优于标准要求，可替代 ELSD 检测器方法。流动相无须预混，针对复杂基质样品可梯度洗脱。
3. 针对第二法 HPLC-MS/MS，赛默飞实验室采用 Accucore C18 色谱柱配合高灵敏度三重四级杆质谱仪—TSQ Altis 进行方法验证，试验结果表明：三氯蔗糖质谱参数经优化后，保留良好，响应优异；方法灵敏度高，线性低点 (10.0 ng/mL) 信噪比为 206；线性范围 10.0-500 ng/mL，线性相关系数 r2≥0.9999；方法检出限和定量限均优于标准要求，可用于阳性样品的定性分析或低浓度样品的定量分析。
GB 5009.298-2023 赛默飞应用解决方案
01 第一法 高效液相色谱法
1.1 HPLC-RID Umisil C18 (3), 5 μm, 4.6×250 mm
图 1 Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex-RID (VC-D60) 液相系统
图 2 三氯蔗糖标准品溶液分离谱图及数据 (0.10 mg/mL)
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图 3 三氯蔗糖标准品溶液校准曲线叠加谱图 (0.02-1.00 mg/mL)（点击查看大图）
图 4 三氯蔗糖标准品溶液线性最低点 (0.02 mg/mL) 与空白叠加谱图（点击查看大图）
图 5 三氯蔗糖标准品溶液连续进样叠加谱图 (0.05 mg/mL, n=6)（点击查看大图）
图 6 三氯蔗糖标准品溶液与无糖可乐样品溶液叠加谱图
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1.2 HPLC-CAD Hypersil GOLD C18, 5 μm, 4.6×250 mm
图 7 Thermo Scientific™ Vanquish™ Core-CAD 液相系统
图 8 三氯蔗糖标准品溶液分离谱图及数据 (10.0 μg/mL)
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图 9 三氯蔗糖标准品溶液校准曲线叠加谱图 (1.00-50.0 μg/mL)（点击查看大图）
图 10 三氯蔗糖标准品溶液线性最低点(1.00 μg/mL)与空白叠加谱图（点击查看大图）
图 11 三氯蔗糖标准品溶液与无糖可乐样品溶液叠加谱图
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图 12 无糖可乐样品溶液连续进样叠加谱图 (n=6)
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02 第二法 高效液相色谱-串联质谱法
HPLC-MS/MS Accucore C18, 2.6 μm, 4.6×100 mm
图 13 Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex-TSQ Altis™ 液相系统
图 14 三氯蔗糖标准品溶液提取离子流图 (100 ng/mL)
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图 15 三氯蔗糖标准品溶液校准曲线提取离子流图 (10.0-500 ng/mL)（点击查看大图）
图 16 三氯蔗糖标准品溶液线性最低点 (10.0 ng/mL) 提取离子流图（点击查看大图）
图 17 三氯蔗糖标准品溶液连续进样提取离子流图 (100 ng/mL, n=6)（点击查看大图）
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03 GB 5009.298-2023 相关色谱耗材推荐
第一法 高效液相色谱法
第二法 高效液相色谱-串联质谱法
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