起订量:
SKLS15B1 黄曲霉素B1 ELISA试剂盒
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黄曲霉素B1 ELISA试剂盒
型号:
SKLS15B1
货号:
黄曲霉素B1 ELISA试剂盒 96T
黄曲霉素(AFB1) 酶联免疫试剂盒
1 概述
*是由曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉等产生的次级代谢产物,主要污染玉米、花生、坚果等。天然污染的*以AFB1为主,AFB1具有*的急性毒性和致癌性,肝脏是其主要的靶器官。本试剂盒是以应用单克隆抗体为基础的ELISA检测方法,适用于定量检测饲料和谷物中的黄曲霉素B1。
2 原理
本试剂盒采用直接竞争ELISA方法,在微孔板包被有黄曲霉素偶联抗原,加入黄曲霉素B1标准品或样品,游离黄曲霉素B1与微孔条上预包被的黄曲霉素B1偶联抗原互相竞争抗黄曲霉素B1抗体酶标记物,用TMB底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在450nm波长下进行检测,吸光值与样品中黄曲霉素B1含量成反比。
3 试剂盒组成
3.1 预包被的AFB1偶联抗原的可拆酶标板:1块(12孔×8条)。
3.2 AFB1标准品:6瓶(1ml/瓶),含量分别是: 0 ng/ml,0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml。
3.3抗AFB1抗体酶结合物:1瓶(6ml),棕色溶液。
3.4显色液A:1瓶(6ml),过氧化脲。
3.5显色液B:1瓶(6ml),四甲基联苯胺。
3.6终止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
3.7*:1瓶(10×,25ml),用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液:1瓶(10×,40ml),用于洗板。
3.9说明书一份。
4 需要而未提供的材料
4.1 设备
4.1.1波长450nm酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2 试剂
4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 不要使用过期试剂盒。
6.3 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。
6.4 标准品中含有黄曲霉素,使用时应特别注意,操作时应带手套。
6.5 终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。
6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响实验结果。
6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的*,否则会影响实验结果
6.9 混合试剂时应避免起泡。
7 工作液准备
7.1 AFB1标准品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
7.2 浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释
7.3 显色剂:已备用,避免光线直照
7.4 反应终止液:已备用
8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2强力振荡3分钟
8.3用Whatman 滤纸过滤
8.4取100µl处理后的样品,加入400µl*
8.5取50μl稀释液进行分析(稀释倍数10)
9 酶免分析步骤
9.1 实验须知
9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保证回温充分,否则影响检测的精确度和准确度。
9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存
9.1.3 请不要改变分析程序
9.1.4 请使用精确的微量移液器
9.1.5 操作一旦开始,请不要中断任何程序
9.1.6 ELISA结果的可重复性*程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作
9.1.7 为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
9.2 分析步骤
9.2.1 预*行编号,标记B0、标准品和样品的位置,*进行双孔检测
9.2.2 取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(10×)稀释成工作液
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml标准品溶液
9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液
9.2.6 在各样品孔中加入50µl样品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗黄曲霉素B1抗体酶结合物
9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。
9.3 室温下(25±2℃)温浴10min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)
9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。
9.4 反应
9.4.1 洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A,再加 50µl显色液B;轻微晃动反应板使之*混匀
9.4.2 室温下(25±2℃)温浴10min
9.4.3 每孔中加入50µl终止液,混匀
9.4.4 在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。
10 结果计算
10.1定量分析
10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以*个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以*,即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值
10.1.2以黄曲霉素B1浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为AFB1浓度的对数值,求得反对数即为测定液中AFB1浓度C(ng/ml)
10.1.3由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
10.2 半定量测定
10.1.1目测半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
10.1.2仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
11 特异性
物质 交叉反应
黄曲霉素B1 *
黄曲霉素B2 80%
黄曲霉素G1 75%
黄曲霉素G2 30%
12 试剂盒参数
本试剂盒检测下限为0.1ppb
B0吸光度值应大于1.0
试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80%。
13 标准曲线模式(仅供参考)
试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ng/ml~8.1ng/ml。
14 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。
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